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實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

小鼠膀胱上皮分離自膀胱組織；膀胱是一個儲尿器官，在哺乳類動物，它是由平滑肌組成的一個囊形結構，位于骨盆內，其后端開口與尿道相通。膀胱與尿道的交界處有括約肌，可以控制尿液的排出。膀胱壁由三層組織組成，由內向外為黏膜層、肌層和外膜。肌層由平滑肌纖維構成，稱為逼尿肌，逼尿肌收縮，可使膀胱內壓升高，壓迫尿液由尿道排出。在膀胱與尿道交界處有較厚的環形肌，形成尿道內括約肌。在括約肌收縮能關閉尿道內口，防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分為三層：即漿膜層（蜂窩脂肪組織）、肌肉層（逼尿肌、膀胱三角區肌）和黏膜層（極薄的一層移行上皮組織）。其主要作用有：①組成過濾屏障內壁的重要部分；②在炎癥和致血栓物質的刺激合成必要的生物活性分子；③受損后影響系膜細胞和上皮細胞，進而影響腎臟病變。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠膀胱移行上皮采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠膀胱移行上皮經Cytokeratin-AE1/AE3免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

大鼠內皮素2(EDN2)檢測試劑盒 ，英文名： EDN2 ELISA Kit

Mouse platelet factor 4 (PF-4/CXCL4) ELISA Kit 小鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)檢測試劑盒

RatGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISAKit 大鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGIP(Humangasicinhibitorypolypeptide)ELISAKit人胃抑素

細胞脯肽酶(prolidase;PLD)紫外比色法定量檢測試劑盒20次

Ratsolublereceptoractivatorofnuclearfactor-kBligand,sRANKLELISAKit大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)檢測試劑盒規格：96T/48T

SLAMF8重組小鼠 SLAMF8 / BLAME 蛋白 Protein

Alpha-AF/ Alpha-Afa(alpha-L-arabinofuranosidase 0.5mgAlpha-AF/ Alpha-Afa(alpha-L-arabinofuranosidase) α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗原

AGER重組人 AGER / RAGE 蛋白 Protein

CXCL1 Protein Human 重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 標簽)

BST1 Protein Rat 重組大鼠 CD157 / BST1 蛋白

胞外5'-核苷酸酶(NT5E)重組蛋白 Recombinant 5'-Nucleotidase, Ecto (NT5E)

CXCL1 Protein Human 重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 標簽)

ST6GALNAC2重組小鼠 STHM / ST6GALNAC2 蛋白 Protein

CD53 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD53 蛋白 (aa 107-181, Fc 標簽)

EBAG9重組人 RCAS1 / EBAG9 蛋白 Protein

小鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human glucokinase regulatory protein (GKRP) ELISA Kit 人葡萄糖激酶調節蛋白(GKRP)檢測試劑盒

HumanhepatitisBvirusXieractingprotein,HBXIPELISAKit 人乙型肝病毒X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanactivatedcoagulationfactorⅫ,FⅫa檢測試劑盒人活化Ⅻ(FⅫa)檢測試劑盒規格：96T/48T

脂肪氧化酶(lipoxygenase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

MouseangiotensionⅠ,Ang-ⅠELISAKit小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)檢測試劑盒規格：96T/48T

小鼠膀胱移行上皮細胞小鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠巨噬細胞性蛋白5(MIP-5)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠巨噬細胞性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠巨噬細胞性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝