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產(chǎn)品名稱:阿留申病病毒LAMP試劑盒
產(chǎn)品特點(diǎn):阿留申病病毒LAMP試劑盒上海一研生物相關(guān)產(chǎn)品:核黃素腺嘌呤二核苷酸二鈉 FAD 20mg 瓶Palmatine hydrochloride 鹽酸巴馬汀 10605-02-4 20mg(直徑)13mm水系濾器 0.22um 個(gè)
產(chǎn)品型號(hào):50次
更新日期:2021-02-01
訪問(wèn)次數(shù):327
50次阿留申病病毒LAMP試劑盒的詳細(xì)資料:
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 | 阿留申病病毒LAMP試劑盒 |
英文名稱 | Lamp kit for Aleutian disease virus |
規(guī)格 | 50次 |
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
XTT鈉鹽 XTT sodium salt 50mg 瓶
Kanamycin ( 100mg/ml) 5ml 瓶
Fast Blue BB Salt 固藍(lán)BB鹽 5g 瓶
酚:仿=25:24(pH<5.0) 500ml 瓶
核黃素腺嘌呤二核苷酸二鈉 FAD 20mg 瓶
Palmatine hydrochloride 鹽酸巴馬汀 10605-02-4 20mg
(直徑)13mm水系濾器 0.22um 個(gè)
DNase-RNase-Free Water 100ml 瓶
Valnemulin Hydrochloride 鹽酸沃尼妙林 5g 瓶
羊抗雞IgG-RBITC 0.5ml 支
High Oxidized LDL 高氧化型低密度脂蛋白 4mg 瓶
Ginsenoside Rc 人參皂苷Rc 11021-14-0 20mg
阿留申病病毒LAMP試劑盒狗 CD40LG 基因全長(zhǎng)ORF克隆
大鼠 CD62L / SELL 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 ADAM15 CHO細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
人 BTC / Betacellulin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠 IL20RB 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
人 CD10 / MME / Neprilysin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
人 CD40 / TNFRSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 IL6ST / CD130 CHO細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
人 INTS4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 PRRC2B 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 CPN1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 Syk 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
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