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原代細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
點(diǎn)擊次數(shù):588 更新時間:2020-07-24
原代細(xì)胞是指來源活體組織,經(jīng)過特定分離方法制備而成的初始細(xì)胞。
原代細(xì)胞離體時間短且不經(jīng)過永生化過程,其生物學(xué)特性未發(fā)生很大變化,仍保持原有的遺傳特征,可更好地反映細(xì)胞在體內(nèi)的生長狀態(tài),從而獲得與體內(nèi)生理功能更接近的數(shù)據(jù),很適合用于藥物測試、細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)研究。
原代細(xì)胞是出了名的難養(yǎng),對培養(yǎng)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)操作的要求更苛刻。細(xì)胞在體外通常只能傳代少數(shù)幾次,某些細(xì)胞(如神經(jīng)元細(xì)胞)甚至無法進(jìn)行傳代。對于研究人員來說,如何才能經(jīng)濟(jì)高效地培養(yǎng)好細(xì)胞,并圍繞這有限幾次傳代的細(xì)胞設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),是更大的一個挑戰(zhàn)。
原代細(xì)胞是取材于切除的動物組織,通過酶處理,在適當(dāng)?shù)臈l件下培養(yǎng)直至達(dá)到足夠的數(shù)量。分離的細(xì)胞有兩種類型:貼壁細(xì)胞(錨定依賴性生長)和懸浮細(xì)胞(錨定非依賴性),貼壁細(xì)胞多來自器官組織,而懸浮細(xì)胞多來自血液系統(tǒng)的細(xì)胞。
從組織制備細(xì)胞,即使捱過了極其嚴(yán)苛的解離步驟,不嚴(yán)謹(jǐn)?shù)姆蛛x操作可能會導(dǎo)致細(xì)胞生長緩慢、表型不一致甚至細(xì)胞污染,特別是由于組織中可能含有細(xì)菌等微生物,污染問題對于細(xì)胞的分離和培養(yǎng)是一個很大的隱患。而為了讓研究人員不再為這些問題頭疼,現(xiàn)在已經(jīng)出現(xiàn)了一些細(xì)胞公司可供應(yīng)現(xiàn)成的細(xì)胞,并對應(yīng)配有充分優(yōu)化的培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)方案,這使得細(xì)胞的培養(yǎng)和研究比以往要輕松得多。
而對于具備自主從組織中獲取細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)室,也建議以商業(yè)化的細(xì)胞作為對照,采用均一性和穩(wěn)定性更好的P2/P3代次進(jìn)行實(shí)驗(yàn),并用專門的細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),zui大限度提高原代細(xì)胞的生長。
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