1-磷酸鞘氨醇檢測試劑盒操作步驟:
1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。
2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。
4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。
7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯色15min。
10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11、測定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
12、計算:根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。最終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
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