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抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時(shí)由于試驗(yàn)的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來(lái)包。應(yīng)注意:
由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用,這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán),故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐,看一下zui終可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
封閉
繼包被之后用高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。
常用封閉劑有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉,比較價(jià)廉,可以高濃度使用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動(dòng)物血清和酪蛋白等等。但zui終選用什么,要依據(jù)試驗(yàn)具體來(lái)實(shí)踐。
洗滌板
可以說(shuō)在抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒操作中,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù)。因?yàn)榫郾揭蚁┑人芰蠈?duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,為達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的,清除殘留在板孔中游離的物質(zhì),以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì),在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)。所以在洗板時(shí)會(huì)有一定誤差,人為因素很大(當(dāng)然有條件的用洗板機(jī)除外),洗的不*或串了孔,對(duì)如此靈敏的ELISA系統(tǒng)可是不小的影響。
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抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒
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